Laboratorio

•  Demuestre los cambios que se presentan en la cinética enzimática de la sacarasa. La levadura que se emplea para hornear pan, es un hongo que tiene una enzima específica que utiliza como sustrato a la sacarosa (azúcar común) obteniendo glucosa por medio de una hidrólisis enzimática. Los monómeros obtenidos son metabolizados por la levadura liberando CO2 responsable del aumento de volumen en el pan. Identifique a la sacarosa como sustrato específico de la sacarasa contenida en el hongo de manera que proponga la ecuación que describa la cinética de la sacarasa.
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• Observe en la ecuación de Michaelis-Menten que la cinética enzimática está en función de las concentraciones del sustrato y de la enzima a pH y temperatura óptimos. Demuestre experimentalmente los cambios que se presentan en la cinética enzimática catalizada por la sacarasa al modificar los parámetros que determinan su función, realizando las siguientes acciones. Elabore el sustrato con medio kilogramo de harina, seis cucharadas de azúcar, agregue una cucharada sopera (30 gr. aproximadamente) de levadura de pan que contiene a la enzima sacarasa y mezcle. Separe en dos partes iguales de manera que una parte se amase perfectamente con agua, esta a su vez se divide en tres partes iguales y se coloca en tres recipientes (rotulados como A, B y C) a diferentes temperaturas: el vaso A se coloca a temperatura ambiente (25ºC), el vaso B a 30ºC (puede ocupar baño María y controlarlo a esa temperatura), y el vaso C en refrigeración (8ºC), (coloque una marca en cada uno de los recipientes para considerarlo como condición inicial de volumen). Observe después de 30 minutos de haber dejado las masas cubiertas con gasas, en reposo y proceda a medir el volumen de la masa de manera cualitativa sólo anotando si aumenta, disminuye o permanece constante y registre en la siguiente tabla.
• La otra mitad del sustrato (mezcla de harina, azúcar y levadura) dividirlo también en tres porciones iguales. La primera porción amasarla con agua, la segunda porción amase con disolución de café (pH ácido), y la última porción amase con agua de betabel -obtenida de la cocción del betabel- (pH alcalino). De esta manera se modifican las condiciones de pH. Observe después de 30 minutos de haber dejado las masas cubiertas con gasas, en reposo y proceda a medir el volumen de la masa de manera cualitativa sólo anotando si aumenta, disminuye o permanece constante y registre en la siguiente tabla. A B
• Interprete a través de la comparación de los datos obtenidos que las variaciones en el volumen de la masa dependen de las condiciones en las que se desarrolla el experimento y que tienen relación con la función enzimática. La cinética enzimática se afecta también por las variaciones en las concentraciones de sustrato y enzima. El siguiente experimento lo demuestra. Mezcle medio kilogramo de harina con 30 gr. de levadura y divídalo en tres partes iguales y a cada porción se le tratará de la siguiente manera. Sustrato A Harina con levadura + 2 1cuch. de azúcar Sustrato B Harina con levadura + 1 1cuch. de azúcar
• Agregue el agua suficiente a cada una hasta formar una masa, colóquela en tres recipientes designados como A, B C. Observe los cambios cualitativos en el volumen, el tiempo que transcurre en manifestarse dicho cambio regístrelo en la siguiente tabla.
• Para modificar la concentración de la enzima utilice medio kilogramo de harina y agregue seis cucharadas soperas de azúcar y divida los sólidos en porciones iguales, agregando la levadura en las proporciones indicadas en la siguiente tabla.
• Agregue agua suficiente hasta formar una masa y colóquela en los recipientes correspondientes (A, B, C) Observe los cambios cualitativos del volumen y el tiempo en el aparecen dichos cambios. Registre sus datos en la tabla.